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미세방울 디지털 PCR
Droplet Digital Polymerase Chain Reaction (ddPCR) System
  • 호실
    생명과학관 8319호
  • 제조사(모델)
    BIO RAD (QX200)
  • 담당자
    박경진
  • 이메일
    pkj@hallym.ac.kr
  • 연락처
    033-248-3456
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본 장비는 자연과학대학 생명과학과에서 관리하고 있는 장비로 예약관련 문의는 담당자  033-248-            으로 문의하시기 바랍니다.

원리 및 특성

1. 미세방울 디지털 검출 장치는 정밀도 및 정확도에서 높은 감도로 표적 DNA 분자를 측정하여 절대적인 양을 제공할 수 있어, PCR을 통한 정량 분석에 뛰어난 성능을 제공합니다.
2. 미세방울 디지털 검출 장치는 표준 검량선을 사용하지 않고 DNA 정량을 함으로써 혁신적인 접근 방식을 제공합니다.
3. 미세방울 디지털 검출 시스템은 샘플 당 20,000개의 매우 균일한 1nl 크기의 미세방울을 생성하기 위해 고급 미세 유체 기술을 사용합니다.
4. 미세방울 발생기는 DG8TM 카트리지와 호환되며, 총 여덟 개 시료로부터 미세방울을 생성하는데 2 분 정도 소요됩니다.
5. 유전자 증폭기에서 PCR 후, 모든 샘플의 미세방울이 검출기에서 하나의 파일로 스트리밍 됩니다.
6. 미세방울 검출기는 시료 당 최대 두 개의 형광 염료 검출을 수행합니다. FAM (또는 EvaGreen) 및 HEX (또는 VIC)를 사용할 수 있습니다.
7. 미세방울 검출기는 각각의 방울에서 형광 시그널을 감지합니다. 이 시스템은 두 개의 LED를 사용하여 두 개의 PMT (Photomultiplier tube)의 각 채널을 사용하여 시그널을 감지합니다.
8. 미세방울의 형광 시그널을 검출하는 과정에서 자동으로 두 채널 모두 형광을 감지합니다.
9. 시스템은 DNA 샘플에서 대상 서열의 copy 하나까지 감지 할 수 있습니다.
10. ddPCR 시스템은 TaqMan probe와 DNA 결합하는 EvaGreen 염료와 호환됩니다.
11. PCR 양성 및 음성 미세방울은 디지털 형식으로 취합되어 표적 DNA의 절대적인 양을 제공하기 위해 계산됩니다.
12. 읽지 않은 미세방울의 DNA는 회수하여 다른 용도의 분석에 사용 할 수 있습니다.
13. 데이터는 FAM(또는 EvaGreen), HEX (또는 VIC) 의 미세방울 당 형광 진폭 값을 표시해 줍니다.
14. 소프트웨어는 미세방울과 각 샘플에 대해 계산하고, 농도 (copies/ul) 당 두 개의 형광 물질에 대한 다중 데이터를 보여줍니다.

규격

 

A. 제품 구성 :

1. 미세방울 생성기 1 sets
2. 미세방울 검출기 1 sets
3. 데이터 분석 소프트웨어 1 copies
4. 데이터 처리용 PC 시스템 1 sets

B. 제 원 :

1. 미세방울 생성기

1) 크기 (W x D x H) 28cm x 36cm x 13cm
2) 무게 4.5 kg
3) 개시 시료량 20 μl
4) 카트리지 당 시료 용량 8 samples
5) 시료 당 미세방울 수 20,000개

2. 미세방울 검출기
1) 크기 (W x D x H) 66cm x 52cm x 29cm
2) 무게 26 kg
3) 시료 분석 속도 시간당 32 wells
4) 용량 1-96개 시료
5) 광원 Light emitting diodes (LEDs)
6) 검출기 Multi-pixel photon counter
7) 검출 가능 형광물질 FAM, VIC, HEX, EvaGreen
8) 검출 범위 5 orders of magnitude
9) 정확성 ±10%
10) 플레이트 당 미세방울 수 약 1,500,000개

3. 데이터 분석 소프트웨어

1) OS Windows 10 64 bit
2) 메모리 최소 8GB
3) 자료 분석
(1) Poisson algorithm을 기반으로 표준 검량선(standard curve) 없이 절대정량값으로 PCR 정량 분석 가능
- CNV 실험분야 : reference 값과 target 값을 사용하여 자동으로 CNV 계산
- 돌연변이 실험 분야 : mutant와 wild type 각각 정량 및 fractional abundance 자동계산
(2) 미세방울 내의 형광 살포 정도
(3) copies/ul 단위로 농도 산출
(4) 엑셀, 워드 및 파워포인트 파일로 복사 및 붙여넣기 가능
(5) 반복실험끼리 중첩분석 가능
(6) 돌연변이 검출, 카피 수 결정, 게놈 편집 검출, 유전자 발현, 전문가 디자인 분석, 잔류 DNA 정량 및 라이브러리 정량화를 포함한 수많은 응용 분야를위한 디지털 PCR 분석 및 키트사용 가능
ddPCR 분석 : KRAS 스크리닝 분석, EGFR 스크리닝 분석, BRAF 스크리닝 분석 등

4. 데이터 처리 용 PC 시스템

운영체제 :Windows 10 Professional 64 bit 이상의 OS
CPU : 최소사양 6th generation Intel 2 Core processor
 권장사양 8th generation Intel 4 Core processor
시스템메모리 : 최소 8 GB
 권장 32 GB
저장 공간 : 최소 500GB
 권장 1TB
모니터 해상도 : 최소 1920 × 1080
포트 : 1개 이상의 USB 포트


D. 기타 부속품 :

1. Plate holder 2 sets
2. Cartridge holder 2 sets
3. DG8 cartridges, 24ea 1 packs
4. Gaskets, 24ea 1 packs

적용(응용)분야

• DNA 또는 RNA와 같은 핵산 시료 정량 및 분석

 - 종양유전자 및 변이 유전자의 검출을 위한 rare allele 검출

 - 미량 virus 정량

 - 병원성 미생물 검출

 - GMO (Genetically Modified Organism) 존재유무 검출

 - 특정 유전자 copy number 계산(정량화)

 - NGS (Next Generation Sequencing) library 정량 확인

 - Single cell 분석

사용료

표시되지 않은 시료전처리, 재료비 및 분석결과의 특별한 해석을 의뢰할 경우에 별도로 요금을 산정함

구분 항목 단위 외부교내기타 비고


관련자료


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